二十一、抑制差减杂交

是由Diatchenko等建立的以抑制性PCR和DNA差减杂交方法相结合的方法。

依据的主要技术有两点：(1)消减杂交；(2)抑制PCR。经抑制差减杂交后的cDNA群体不仅富集了差异表达基因(目的基因)，而且目的基因间丰度的差异经过均等化作用已基本消除，使消减后的cDNA群体为丰度一致的目的基因群体。

转录组测序技术发展至今，已经从一代、二代的短读长，发展到对单个分子边合成边测序，获得超长读长的三代测序。做三代测序最强的公司之一，PacBio，于2019年又再度升级技术，推出了high-fidelity（HiFi）reads。

没错，就是声音还原度超高的那个HiFi，不过Pacbio是高度还原了转录本，在CCS的测序模式下，既保证了长度长又提升了测序序列的准确性。

究竟是改变了哪一步，PB才扭转了测序错误率高的局面，有了HiFi的结果呢？

PCR扩增DNA时，怎么保证分开的双链就与引物结合

问题：PCR扩增DNA时，降温复性是让引物与分开的双链结合，这时怎么保证分开的双链就与引物结合而不是原来的两条母连彼此重新结合？

解释：原因有两个：
1.完全解链的两条母链自动复性需要时间长，需要10小时以上才能复性完全。