大家好，本期百代大课堂主要讲解miRNA茎环逆转录与荧光定量的相关知识点。如需了解miRNA加尾法可查阅上期视频内容。本次视频分为以下四个内容。
·第一部分：miRNA茎环法逆转录原理。该原理是利用一种稳定的双链结构，茎环(stem-loop)结构作为逆转录引物，与miRNA中目标序列互补结合，形成DNA/RNA复合体。随后利用逆转录酶将RNA序列逆转录为cDNA，从而实现miRNA表达的测量和分析等功能。下图所示即是miRNA茎环法原理及过程。
2024年10月20日
大家好，本期百代大课堂主要讲解miRNA茎环逆转录与荧光定量的相关知识点。如需了解miRNA加尾法可查阅上期视频内容。本次视频分为以下四个内容。
·第一部分：miRNA茎环法逆转录原理。该原理是利用一种稳定的双链结构，茎环(stem-loop)结构作为逆转录引物，与miRNA中目标序列互补结合，形成DNA/RNA复合体。随后利用逆转录酶将RNA序列逆转录为cDNA，从而实现miRNA表达的测量和分析等功能。下图所示即是miRNA茎环法原理及过程。
2024年10月20日
前面介绍了体外展示技术mRNA展示，与之类似的是核糖体展示，关键点都是基因型和表型一一对应，前者利用嘌呤霉素将蛋白肽与编码mRNA联系起来，而后者则是通过产生非共价三元复合物(多肽-核糖体- mRNA)来实现。mRNA上的翻译终止密码子的消除确保了新合成的肽及其编码mRNA不能从核糖体中释放出来。正常情况下，多肽和mRNA的释放分别通过释放因子(RFs)和核糖体再循环因子(RRFs)
2024年10月20日
随着年龄的增大，III型胶原蛋白的流失越来越快，尤其25岁以后，皮肤中III型胶原蛋白的合成速度赶不上流失速度，最终导致皱纹、松弛等衰老现象。
2024年10月20日
全细胞提取物由1x106 HUVEC镀于6cm的培养皿中，首先从细胞中抽吸培养基，在室温下用PBS洗涤细胞单层两次。
每个孔加入1 ml PBS，随后刮取细胞单层，转移到1.5 ml埃彭多夫管，放置在冰上，80g离心3分钟，使细胞内容物成球。
2024年10月20日
科研人员采用了抑制减法杂交的方法，来阐明卷心菜感染黄单胞菌后引发黑腐病原体抗性的机制，他们选择了卷心菜抗性品种Pusa mukta，并构建了一个富含差异表达转录本的cDNA文库。
目前的研究结果显示，在所研究的单基因中，与防御相关的单基因占总数的35%，科研人员通过半定量RT-PCR确认了与防御特异性相关的基因，并揭示了这些基因在抗性品种中的表达增加，不过问题在于，抗性品种在受到黑腐病细菌病原体攻击时，会引发强烈的超敏反应。
2024年10月20日
PCR — 聚合酶链式反应
优点：方法操作简单，反应快速敏捷，结果可靠
原理：与细胞内发生的DNA复制过程十分相似。
是在模板、引物和4种dNTP（包含A、T、C、G四种碱基的脱氧核苷酸）存在条件下，依赖于DNA聚合酶体外扩增目的DNA的反应。
2024年10月20日
有个同学问，他表格中有一条DNA，其中一条的碱基序列，如ATTAGACC....如何快速将它的另外一条序列计算出来呢？
那首先我们要拿起初中生物学的关于基因的知识，两个序列是一一对应的，对应关系是A-T，C-G，也就是说，ATTAGACC...，对应的碱基序列应该是TAATCTGG...
这是在基因中的正好对应，碰到这种类似的经典问题，那如何在Excel中快速的计算?大家集思广益，小编这里提供两种解决思路的方法。
第一种思路，先分列，再合并
2024年10月20日
张俊海，解放军306医院，神经外科
1989 年，Janeway 提出了病原体和宿主先天性免疫防御之间存在分子模式识别受体(patternrecognitionreceptor, PRR) 的假说.
研究显示，作为炎症反应的中心环节，炎性小体与很多疾病密切相关。其中，与NLRP3 炎性小体相关疾病较多。首先是遗传性疾病。最初发现与炎性小体相关的疾病是穆- 韦氏综合征，属Cryopyrin蛋白相关综合征，主要因基因突变导致NLRP3 炎症小体过度激活，产生过量的IL-1β。临床上使用IL-1β 抑制剂能缓解穆- 韦氏综合征患者的症状。其次是炎性疾病。一些晶体包括二氧化硅、石棉等也通过NLRP3 炎性小体来诱发肺部炎症反应。现有研究结果认为，急性肺损伤发生发展的重要因素之一是过度失调的炎症反应。同样，IL-1β 的靶向治疗能够缓解痛风和关节炎等疾病，提示炎性小体与该疾病也有关联，这在Martinon等 的研究中得到了证实。再次是一些慢性疾病。关于2 型糖尿病与炎性小体之间的关系，牵涉NLR的论据第一次由Tschopp 实验室提出，nlrp3 敲除的小鼠高脂饮食8 周后比野生型小鼠糖耐量更高，对胰岛素更敏感。Latz 实验室的工作表明，动脉粥样硬化的形成和NLRP3 炎性小体的激活有关。另一方面，阿尔兹海默病的淀粉样斑块、肌萎缩侧索硬化症中突变的SOD1、老年性黄斑变性中的玻璃膜疣以及相关疾病中的朊病毒 都可以激活NLRP3 炎性小体，但目前没有证据显示IL-1β或者IL-18 抑制剂对患者有益。Nlrp1 基因突变的小鼠，其祖细胞的死亡率明显增加，由于祖细胞在受到感染或者化疗时具有易感性，最终可以导致血细胞减少症。此外，nlrp1 基因突变也可以引发黑色素细胞功能异常所导致的白癜风。炎性小体对肿瘤的发生发展也有一定作用。Dinarello 指出，IL-1 能够介导趋化因子、基质金属蛋白酶、黏附因子等促进肿瘤转移的蛋白的表达，加速肿瘤的发展；在小鼠炎性肠病模型中，IL-18 的抑制剂能够减少肿瘤的发生率。在NLRs 家族蛋白中，NLRP3、NLRP6 和NLRC4 对结肠炎起作用，并且可以影响肿瘤的发生率。炎性小体也牵涉其他的癌症，包括皮肤癌和骨髓瘤，虽然还不知道是哪种炎性小体参与，但是在有些临床试验中，靶向IL-1 的治疗对皮肤癌和骨髓瘤是有益的。
2024年10月20日
利用某种生物的总mRNA合成cDNA，再将这些cDNA与载体连接，转入细菌细胞中进行保存和扩增，称cDNA文库。cDNA 文库不同于基因组文库，被克隆的 DNA 是从 mRNA 反转录来源的DNA，组成特点是其中不含有内含子和其他调控序列，因此进行 cDNA 克隆时应先从获得 mRNA开始，在此基础上，通过反转录酶作用产生一条与 mRNA 相互补的 DNA 链，然后除掉mRNA，以第一条 DNA 链为模板复制出第二条 DNA 链（双链）；再进一步把此双链插入原核或真核载体。